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?:abstract
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A produção de embriões bovinos in vitro é deficiente devido a aspectos tais como as condições subótimas onde se desenvolvem, as quais induzem a apoptose conduzindo a uma baixa criotolerância. Objetivou-se modular a ativação da apoptose e a síntese lipídica via ativação dos receptores proliferadores para diminuir a apoptose celular e aumentar a criotolerância. No experimento 1 foram colocados aleatoriamente para cultivo embrionário (dia 1) presumíveis zigotos (grupo controle n=609; grupo DHA n=611; e grupo L-165041 n=608). A taxa de clivagem foi avaliada no dia 2 (D2) e a produção de blastocistos no dia 7 (D7). Para avaliar a taxa de apoptose pre vitrificação foram fixados embriões no D7 para o ensaio de TUNEL. O acumulo lipídico foi analisado pela técnica de Sudan Black em embriões fixados no D7. No experimento 2 foram vitrificados e desvitrificados (grupo controle n=98; grupo DHA= 76; L- 165041= 111) para avaliar a taxa de eclosão. Aqueles embriões que eclodiram foram congelados para analisar o perfil lipídico pela técnica de espectrometria de massa (MALDI- MS). A taxa de apoptose pós vitrificação foi analisada pelo ensaio de TUNEL. No experimento 1 a produção de blastocistos em D7 foi menor no grupo DHA quando comparada com a produção dos grupos controle e L-165041 (P < 0.05). Por outro lado, a proporção de células da MCI foi maior, e as taxas de apoptose total e da MCI foram menores no grupo L- 165041 quando comparadas às dos grupos controle e DHA (P < 0,05). Por sua vez, o grupo DHA teve a menor proporção de MCI e as maiores taxas de apoptose total e da MCI quando comparado com os grupos controle e L-165041 (P < 0,05). No grupo DHA, as mitocôndrias exibiam sinais de estresse celular, assim como várias células apresentaram vacuolização intensa. A taxa de apoptose total e da massa celular interna foi reduzida (P<0,05) no grupo L- 165041, quando comparada às dos grupos DHA e controle. No experimento 2 as taxas de eclosão das 36h às 72h após desvitrificação foram maiores (P < 0.05) no grupo L-165041 comparadas ás do grupo controle, e a partir das 48h com o grupo DHA. Foi encontrada uma abundancia relativa das fosfatidilcolina (PC) protonada (34:2) + H]+ e PC oxidado [PC (36:1) + H]+ no grupo L-165041 comparado com o grupo controle. O grupo DHA teve uma maior abundância relativa (P <0.05) da PC protonada (32:0) comparado com o grupo controle. Em conclusão, a adição de L-165041 no cultivo embrionário diminui a apoptose pré e pós vitrificação. O estudo indica que a adição de 1M de L-165041 no meio de cultivo aumenta a proliferação celular pré vitrificação e diminui a apoptose pré e pós vitrificação, além de aumentar a criotolerância. Por outro lado, a adição de DHA diminui o desenvolvimento embrionário não sendo aconselhável seu uso na PIVE nas condições deste estudo.
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